實(shí)驗(yàn)步驟:
1) 用適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切核酸酶消化載體DNA和目的基因；
2) 按連接步驟連接目的基因和載體，并轉(zhuǎn)化到轉(zhuǎn)化DH5α感受態(tài)細(xì)胞中；
3) 分別挑取單菌落接種于5 mL LB ( 0.1 g·L-1 氨芐青霉素)中，37℃培養(yǎng)過(guò)夜；
4) 以2 %體積比轉(zhuǎn)接于2 ml LB( 0.1 g·L-1 氨芐青霉素)中，37℃繼續(xù)培養(yǎng)2.5 hr，至細(xì)菌對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期
加0.1 mmol/L IPTG 2 µl誘導(dǎo)3-4 hr，同時(shí)設(shè)立不加IPTG誘導(dǎo)作為對(duì)照；
5) 取上述菌液1 mL，12000 rpm離心10min，收菌沉淀；
6) 重懸于冰的100 µl PBS中，加入PMSF至終濃度為10 mmol/L。震蕩器震蕩混勻，加入2×加樣緩沖液，
煮沸10 min變性，12,000 rpm離心10 min；
7) 分別取誘導(dǎo)前和誘導(dǎo)后的樣品10 µl進(jìn)行SDS-PAGE電泳分析。
（PS：如果表達(dá)載體的原核啟動(dòng)子為PL 啟動(dòng)子，則在30 -32 ℃培養(yǎng)數(shù)小時(shí)，使培養(yǎng)液的OD600達(dá)0.4-0.6，
迅速使溫度升至42 ℃ 繼續(xù)培養(yǎng)3 -5h ；
如果表達(dá)載體的原核啟動(dòng)子為tac 等，則37 ℃培養(yǎng)細(xì)菌數(shù)小時(shí)達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后
加IPTG 至終濃度為1 mmol / L，繼續(xù)培養(yǎng)3 -5h）
經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)會(huì)發(fā)現(xiàn)，IPTG的濃度并不是越大越好。這是由于IPTG對(duì)菌體具有一定的毒性，超過(guò)濃度也會(huì)殺死細(xì)胞；
而且一般來(lái)講，我們希望細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的可溶性蛋白越多越好，但是很多時(shí)侯I(lǐng)PTG濃度太高會(huì)形成大量包涵體，而可溶性蛋白的量反而減少。
因此，最合適的IPTG濃度往往不是越大越好，反而濃度較低。
對(duì)基因工程菌株進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)目的在于提高目的蛋白的產(chǎn)量，降低成本。
目的基因的表達(dá)量除受菌株自身因素和表達(dá)質(zhì)粒的影響外，還受其他外界條件，如誘導(dǎo)物濃度、誘導(dǎo)溫度和誘導(dǎo)時(shí)間等的影響。
所以一般情況下，一個(gè)未知的蛋白在表達(dá)純化之前，最好要對(duì)誘導(dǎo)時(shí)間，溫度以及IPTG濃度進(jìn)行研究，以便選擇合適的條件，獲得最好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
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